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Invece, le condizioni della PCR dovranno essere ottimizzate; considerare quanto segue quando si regolano le condizioni della PCR:
- Riduci la quantità di template.
- Aumentare la temperatura di ricottura.
- Usa touchdown PCR.
- Ridurre il numero di cicli PCR.
- Ridisegna i primer.
- Usa primer annidati.
- Ri-amplificare il prodotto.
- Perché la mia PCR non funziona??
- Come si ottimizzano le condizioni della PCR??
- Quali sono le cause della sbavatura nella PCR?
- Come fai a sapere se la PCR è contaminata??
Perché la mia PCR non funziona??
Dimenticare solo un componente della reazione PCR, che si tratti della DNA polimerasi, dei primer o persino del DNA stampo, risulterà in una reazione fallita. La soluzione più semplice è ripetere la reazione. ... Se non c'è ancora alcun prodotto PCR dopo questo, è probabile che ci sia qualcos'altro che ostacola la tua reazione.
Come si ottimizzano le condizioni della PCR??
Condizioni della PCR
- Utilizzare temperature di denaturazione più elevate (e.G., 98°C anziché 94°C o 95°C) per consentire la completa denaturazione del templato.
- Riduci al minimo i tempi di ricottura per i modelli ricchi di GC.
- Utilizzare primer con T . più altom (>68 ° C), perché la ricottura può avvenire a temperature più elevate.
Quali sono le cause della sbavatura nella PCR?
La contaminazione del DNA, l'RNA nel campione di DNA, l'elevata concentrazione di DNA nella reazione PCR può causare sbavature. ... Sbavatura del DNA solitamente causata nelle piante a causa dell'elevata concentrazione di DNA stampo.
Come fai a sapere se la PCR è contaminata??
Per verificare la contaminazione della soluzione, assemblare le reazioni di controllo negativo utilizzando nuovi reagenti noti per non essere contaminati e aggiungere una delle soluzioni sospette a ciascuna reazione. Quella reazione mostra prodotti amplificati indicativi di contaminazione è la prova che la soluzione aggiunta è stata contaminata.
