Nessuna amplificazione PCR

1. Perché non c'è amplificazione nella PCR??
2. Perché il mio DNA non si è amplificato??
3. Cosa succede se i primer non vengono aggiunti alla PCR?
4. Come si risolve l'amplificazione non specifica nella PCR??

Perché non c'è amplificazione nella PCR??

Se la quantità iniziale di templato è troppo bassa, può verificarsi un'amplificazione insufficiente. Aumentare il numero di cicli di amplificazione con incrementi di 5 o, se possibile, aumentare la quantità di template. I contaminanti nella miscela dNTP possono portare a un'amplificazione incompleta o errata o all'inibizione della PCR. Usa dNTP di alta qualità.

Perché il mio DNA non si è amplificato??

1) potresti avere una cattiva progettazione del primer o una standardizzazione della reazione (quindi, valuta il tuo design del primer e fai, come altri hanno già detto, una PCR a gradiente per valutare diverse temperature di annealing); 2) Nessun DNA (il tuo protocollo di estrazione potrebbe aver fallito) e quindi i tuoi primer possono solo accoppiarsi tra loro (o tra loro).

Cosa succede se i primer non vengono aggiunti alla PCR?

Domanda: se hai dimenticato di aggiungere i primer alla tua reazione PCR, cosa accadrebbe e perché?? 1. La tua reazione fallirebbe perché la Taq polimerasi non può aggiungere basi senza un piccolo pezzo di DNA già presente. ... La tua reazione fallirebbe perché non ci sarebbe nessun enzima in grado di aggiungere nuove basi nucleotidiche.

Come si risolve l'amplificazione non specifica nella PCR??

Utilizzare meno cicli quando la concentrazione del templato è alta e utilizzare più cicli quando la concentrazione del templato è bassa. 2. Il tempo di estensione era troppo lungo: un tempo di estensione eccessivo può consentire un'amplificazione non specifica. In genere, utilizzare un tempo di estensione di 1 min/kb.